sexta-feira, 17 de julho de 2009

UREASE - H. pylori

Kit para detecção de Helicobacter pylori em amostras fragmentadas de mucosa do antro gástrico.
A UREASE é um meio de cultivo para identificação rápida de Helicobacter pylori em Amostras de tecido extraídas por procedimento clínico. A urease é uma enzima bacteriana que promove a hidrólise da uréia presente no meio de crescimento com fomação de carbonato de amônia. A amônia formada alcaliniza fortemente o meio determinando a viragem do indicador para coloração vermelha no meio. As bactérias que só atacam a glicose deixam o meio amarelo. Na cavidade gástrica, ocorre a formação de amônia e gás carbônico tamponando o pH do meio e levando à formação de uma camada neutra protetora sobre a bactéria produtora. A amônia e a urease desestabilizam a camada de muco levando ao aparecimento de lesões sobre as células de revestimentodo estômago. A urease pode também estar envolvida na ativação de monócitos, linfócitos e do sistema imune provocando uma resposta inflamatória local. A urease é um meio para identificação de fungos dermatófitos como T. rubrum e T. mentagrophytes. Semear os dermatófitos no meio de uréia commum indicador de pH (vermelho de fenol). Deixar em estufa por 20 dias e observar a mudança de pH. Uréase positiva = vermelho, uréase negativa = amarela.
O Helicobacter pylori (Hp) é uma bactéria que vive no muco que cobre a superfície do estômago e foi identificada por dois australianos, Warren e Marshall em 1983.
(Warren e Marshall, por este motivo, receberam o prêmio Nobel da Medicina em 2005. A maior parte da população infectada com H. pylori permanece saudável, sem sintomas e não necessita de tratamento. Apenas uma minoria desenvolve uma doença clínica.

Princípios do Procedimento:

A técnica consiste na coleta de fragmentos de mucosa do antro gástrico de pacientes submetidos à endoscopia digestiva alta e colocação destes num meio que contenha uréia e um indicador de pH. Quando o H. pylori está presente na mucosa antral colhida, a urease por ele produzida desdobra a uréia no meio, poduzindo amônia, levando a aumento do pH e a mudança de cor do indicador (o meio passa de amarelo à vermelho). Alguns testes levam em consideração os resultados até 2 horas após a colocação do fragmento no meio, enquanto o UREASE - H. pylori o faz em apenas 30 minutos.

Desempenho do Kit

Este tem sensibilidade de 89% a 91%, especificidade de 100%, com valor preditivo positivo de 94% e negativo de 100%, com acurácia de 96%, comparável aos demais testes utilizados na detecção do H. pylori , como a cultura, histopatologia, testes sorológicos, teste de urease convencional e teste respiratório com uréia marcada por carbono, que têm sensibilidade e especificidade variando de 90% a 98%. A grande vantagem do teste ultra-rápido da urease é a rapidez de seu resultado, uma vez que a leitura é feita com apenas 1 minuto, e seu baixíssimo custo. Os demais testes necessitam de maior tempo para obter o resultado. A cultura, por exemplo, requer de 3 a 6 dias para o isolamento do microorganismo.

Desempenho do Controle de Qualidade

Cepas de Proteus mirabilis e Klebsiella pneumonia e são utilizadas a cada lote produzido para verificação da funcionabilidade do produto.

Reagentes fornecidos

50 frascos contendo 1ml cada do reagente pronto para uso.

Preparação dos reagentes

Prontos para uso.

Preparação das amostras

De acordo com critérios médicos.

Condições de armazenamento

Conservar todas as unidades do produto em temperatura entre 2ºC - 8ºC até a expiração do kit.

Frascos abertos são passíveis de contaminação rápida. Não abrir e fechar frasco de reagente sem uso imediato.

Todos os frascos contendo reagentes são estéreis.

Qualquer contaminação após o período de controle de qualidade do kit na indústria pode ser devida ao manuseio indevido dos mesmos.

Evitar exposição à saliva ou secreção lacrimal.

Precauções

O reagente deste kit destina-se exclusivamente ao uso "Diagnóstico in vitro";

Não misturar reagentes de frascos diferentes;

Não beba, fume ou coma na área de realização das análises;

Não utilizar o kit após a expiração do seu prazo de validade;

Após a análise, esterilizar os frascos contendo meio de urease com fragmento de tecido e acondicioná-los em lixo hospitalar para descartar;

O reagente sem reação não é infectante;

Em caso de dúvidas quanto ao resultado obtido (coloração vermelha fraca), deve-se associar este dado com sintomalogia clínica do paciente e pesquisa direta do H. pylori por outra metodologia mais sensível (ELISA, por exemplo);

Pacientes podem apresentar clínica para infecção por H. pylori e não apresentarem resultado positivo pelo método rápido da urease. Isto pode indicar a presença de outro microorganismo invasivo. Confirmar o diagnóstico com métodos sorológicos (ELISA, por exemplo);

Verificar se a coleta da amostra foi feita da região da lesão. Se a amostra for retirada de regiões adjacentes teremos um resultado falso negativo.

Instruções para uso

O paciente deve estar em jejum completo de 8 - 12 horas, em repouso absoluto e sedado.

O paciente é submetido à um procedimento de endoscopia digestiva por médico assistente;

Durante o procedimento, um fragmento de tecido é coletado da região do antro gástrico onde visualmente o clínico percebe a presença de lesão com suspeita de H. pylori;

O fragmento de tecido deve apresentar entre 2mm e 10mm;

A amostra a ser analisada deve ser extraída somente da região com lesão evidente;

Retirar o fragmento de tecido com material estéril e colocá-lo imediatamente no meio de uréase para evitar contaminação com outros organismos patogênicos;

Com auxílio de uma pinça estéril esta amostra é depositada dentro do frasco contendo meio de urease.

Quando positiva esta amostra torna o meio vermelho através da mudança de pH em, no máximo, 30 minutos. A intensidade da coloração vermelha é diretamente proporcional à extensão da lesão no paciente.

Quando o resultado é negativo a coloração do meio não se altera.

Amostras com coloração levemente avermelhadas ou rosa fraco devem ser consideradas positivas e confirmadas com a clínica do paciente;

Colorações mais fracas podem indicar que a retirada da amostra não foi feita de modo a coletar do local com lesão mais profunda.